Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩充

从第一次经常出现家兔自身免疫球蛋白到经常出现1改进型乳癌病理呕吐的的演进率在儿童时期就有很好的所述，多个家兔自身免疫球蛋白非典型的儿童中都有70%在肝脏变换后10年内中都风乳癌，而随访15年的儿童这一比率增大到84%。相比，占病理1改进型乳癌一半以上的改进型1改进型乳癌的胃癌机制还很难获取充分的深入研究。

越来越多的人开始常用分期系统来定义1改进型乳癌的的演进：生物本体在经常出现多种家兔自身免疫球蛋白时进入第1先决条件，经常出现本体温异常时进入第2先决条件，经常出现呕吐时进入第3先决条件。一些多发家兔自身免疫球蛋白非典型的生物本体，在1期和2期，的演进较更慢，并演进为胃癌的1改进型乳癌。我们之前所述了一分组在首次侦测到多种家兔自身免疫球蛋白采样后至更少10年无乳癌的更更慢的演进者，这分组症状次数更少，但基本特征亦非为明确。随后，我们发现家兔自身复合物甲基化CD8+T细胞膜底物在的演进较更慢的症状中都基本上不存在，但在全面性胃癌和或多或更少的乳癌症状中都很更容易侦测到。这可能表明，与的演进症状相比，这些症状自身免疫底物的调控增强。

早期推断结论，尽管调控性T细胞膜(Treg)存量正常，但乳癌症状存在一些功能缺失，其中都以外对IL-2的底物能力增大。此外，乳癌症状中都的effectCD4+T细胞膜可能对调控不够具抵抗性，表现为effectT细胞膜的正向逼近，自然产生的Treg和本体外产生的正向Treg，以及复合物亲身经历的CD4+T细胞膜中都IL-2底物逼近。本深入研究的目的是所述了CD4+调控性T细胞膜(Treg)在一小群亦非较更慢的演进者中都的基本特征，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以人群为基础的纵向深入研究，在21岁以下确诊的症状亲属中都检查1改进型乳癌的危险因素。我们之前所述了长期较更慢的演进者的基本特征，他们保有多重家兔自身免疫球蛋白非典型超过10年，但很难经常出现乳癌的病理呕吐，更慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保有无乳癌并愿意发放大量血液采样的较更慢的演进者纳入T和B细胞膜功能深入研究。在目前的深入研究中都，8名更慢的演进者(SP分组)，中都位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的家兔自身免疫球蛋白非典型。所有的与会者都处于1改进型乳癌的演进的1期，尽管一些人随后得不到了家兔自身免疫球蛋白对某些复合物的施打，然而，一名症状早已处于2期至更少6年，但很难经常出现病理呕吐，一名症状被临床为乳癌，该测试者72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究中都对该酪氨酸展开了直接评估。复合外周血单个核底物细胞膜(PBMCs)，采行多模板流式细胞膜练成和T细胞膜正向试验中评估酪氨酸中都Treg的Hz、表改进型和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)展开无指派聚类深入研究，评估Treg表改进型。

结果：与肥胖酪氨酸相比，来自更慢的演进本体的失忆CD4+T细胞膜的指派聚类辨识，启动时命的失忆CD4+ TregHz增大，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)暗示增大有关。一名HbA1c升高的症状与的演进较更慢者和意味着的对照分组相比，Treg著者有所不同。功能推断结论，与肥胖酪氨酸相比，来自较更慢的演进本体的Treg介导的CD4+effectT细胞膜正向明显受损。表现为对effectCD4+T细胞膜CD25和CD134暗示的正向增大。

由此可知1 了解的表改进型深入研究辨识，CD4+Treg亚改进型在更慢的演进路由表中都增大。由FlowSOM生成的Treg过道，涌进在来自所有酪氨酸的活命CD4+CD45RA -细胞膜上。根据记号物暗示鉴别出10个元簇:失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个路由代表一个坦克部队(100个坦克部队)，不够大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由分组周围上色。每个路由中都的饼由此可知声称单个记号的暗示级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以辨识整本体记号暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的孔洞。(e-l)相比金属量为每个metacluster装直通由此可知(金属量> 0.05%)确定为HD和SP分组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞膜(l)。黄色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 常用CITRUS的预测模改进型证实，TregHz的增大是的演进较更慢的标志。分级门控(a - f)和棉花深入研究(g-k)比较SP与会者和意味着的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的代表性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR暗示展开复合，模拟FlowSOM群本体。(b) HD(白斑)和SP(星点)分组以及酪氨酸SP 606(黄色)中都CD25+ cd127的Hz汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的装直通由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示高强度后处理，箭头突出的簇被识别为SP和HD路由表间的不同。(j)装直通由此可知辨识了在SP(星点)和HD(灰点)分组中都，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相比金属量(比率)。(k)直方由此可知辨识每个簇的表改进型(灰色)和Treg记号相比暗示与着重暗示(蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面四人，寄存器Treg_4。着重与所有其他簇中都记号的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检验

由此可知3 与肥胖献血者相比，的演进较更慢者失忆treg的GITR增大。每个失忆CD4+T细胞膜元簇(失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个暗示记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的暗示热由此可知(sp606不以外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR暗示串联，辨识直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon一组符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有酪氨酸以外，p< 0.05(蓝色)酪氨酸SP 606和意味着的HD不以外在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR暗示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(黄色)串联，辨识直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组符号秩检验

由此可知4 来自较更慢的演进的CD4+ treg细胞膜控制effectCD4+T细胞膜的能力增大。SP分组用蓝色的直通和白点声称，HD分组用灰色的直通和白点声称，黄色的直通/白点声称酪氨酸sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被记号为CFSE, Treg按观察的比率氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠活命化细胞膜，培育3同一天展开流式细胞膜练成侦测。(a-d)与CD4+这样的话者相比应的treg培育(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE正向比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的正向比率。常用非典型对照(启动时命的自发细胞膜不含treg)近似值正向比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 effectCD4+T细胞膜对较更慢的演进的T细胞膜活命化的正向不够敏感。SP分组用蓝色的直通和白点声称，HD分组用灰色的直通和白点声称，黄色的直通/白点声称酪氨酸sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel记号，treg按观察的比率氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠活命化细胞膜，培育3同一天展开流式细胞膜练成(CD25反染)和细胞膜因叔父深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE正向百分率(b)。(c,d) CD25正向百分率(c)和CD134正向百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中都的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们推断的论点是，来自较更慢的演进叔父的活命化失忆CD4+Treg在GITR暗示中都获取了扩展和丰富，合理化了促使深入研究Treg在1改进型乳癌风险生物本体中都的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28